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顯微鏡的照明法按其照明光束的形式，可分為“透射式照明”和“落射式照明”兩大類。前者適用于透明或半透明的被檢物體，絕大多數(shù)生物顯微鏡屬于此類照明發(fā)；后者則適用于非透明的被檢物體，光源來自上方，又稱“反射式照明”。
一. 透射式照明
透射式照明法分中心照明和斜射照明兩種形式：
（一） 中心照明，這是最常用的透射式照明法，其特點(diǎn)是照明光束的光軸與顯微鏡的光軸同處一直線上。它又分為“臨界照明”和“柯勒照明”兩種。
1． 臨界照明：這是普通的照明法，光源經(jīng)聚光鏡后會(huì)聚在被檢物體上，光束狹而強(qiáng)，這是它的優(yōu)點(diǎn)。但是光源燈絲像與被檢物體的平面重合，這樣就造成被檢物體的照明呈現(xiàn)出不均勻性，在有燈絲的部分則明亮；無燈絲的部分則暗淡，不僅影響成像的質(zhì)量，更不適用于顯微照明，這是臨界照明的主要缺陷。其補(bǔ)救的方法是光源的前方放置磨砂和吸熱濾光片，使照明變得較為均勻和避免光源的熱焦點(diǎn)長(zhǎng)時(shí)間的照射而損傷被檢物體。
2． 柯勒照明：柯勒照明克服了臨界照明的缺陷，是研究用顯微鏡中的理想照明法。這種照明法不僅觀察效果佳，而且是成功的進(jìn)行顯微鏡照相所必須的一種照明法。光源的燈絲經(jīng)光源聚光鏡及可變視場(chǎng)光闌后，燈絲像第一次落在聚光鏡孔徑光闌的平面處，聚光鏡又將該處光源的像送入物鏡，而在物鏡的后焦點(diǎn)平面處（物鏡的出射光瞳）形成第二次的燈絲像。這樣在被檢物體的平面處沒有燈絲像形成，最后光源的燈絲像不落在觀察者視網(wǎng)膜處，而不成像在視網(wǎng)膜上。因此，在視場(chǎng)內(nèi)不僅看不到燈絲的像，更主要的優(yōu)點(diǎn)是使照明變得均勻，成為理想的照明法。
觀察時(shí)，可改變聚光鏡孔徑光闌的大小，使光源充滿不同物鏡的入射光瞳，而使聚光鏡的數(shù)值孔徑和物鏡的數(shù)值孔徑相匹配。同時(shí)聚光鏡又將視場(chǎng)光闌成像在被檢物體的平面處，當(dāng)改變視場(chǎng)光闌的大小，可使被檢物體平面上的照明范圍隨之而變化。觀察時(shí)，應(yīng)把視場(chǎng)光闌開啟到視場(chǎng)周緣的外切處，使不在物鏡視場(chǎng)內(nèi)的物體得不到任何光線的照明，避免散射光的干擾。
此外，這種照明的熱焦點(diǎn)不在被檢物體的平面處，即使長(zhǎng)時(shí)間的照明，也不致?lián)p傷被檢物體。
（二） 斜射照明：這種照明光束的中軸與顯微鏡的光軸不在一直線上，而是與光軸形成某種角度斜射到被檢物體上，因此稱為斜射照明法。斜射照明又可分明場(chǎng)及暗場(chǎng)斜射照明兩種形式。
明場(chǎng)斜射照明是照明光束經(jīng)聚光鏡后斜射被檢物體而進(jìn)入物鏡；而暗場(chǎng)斜射照明的照明光束是以更大的傾斜度射向被檢物體后不直接進(jìn)入物鏡，而由物體表面所反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡。前者如相襯顯微術(shù)，后者如暗場(chǎng)顯微術(shù)。

二. 落射式照明（Incident illumination）
        落射形式照明又稱“反射式照明”或“垂直式照明”。這種照明的光束來自物體的上方，通過物鏡后射到被檢物體上，這樣物鏡又起著聚光鏡的作用。這種照明法是適用于非透明物體，如金屬，礦物以及大而厚的生物樣品的鏡檢。