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    偏光顯微鏡放大法

    1.普通光學(xué)偏光顯微鏡

    普通光學(xué)偏光顯微鏡(light microscope)以可見光(日光或燈光)為光源，波長0.4μm-0.7，平均約0.5μm,其分辨距離為光波波長的一半，即0.25μm。0.25μm的微粒經(jīng)油鏡放大1 000倍后成0.25mm一般而言，徽生物(除絕大多數(shù)病毒外)的直徑都大于0.25μm，故可用普通光學(xué)顯微鏡予以觀察。如在光鏡上裝配暗視野聚光器，則成為暗視野顯微鏡。觀察時(shí)黑暗的背景中可看到發(fā)亮的國體，明暗反差提高了觀察效果，多用于不易染色的微生物(如螺旋體等)的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)觀察。

    相差偏光顯微鏡利用相差板的光柵作用，能顯示出徽生物結(jié)構(gòu)不同部位的差異。可用于觀察微生物的形態(tài)、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、運(yùn)動(dòng)方式及繁殖過程，多用于偏光顯微鏡不易觀察的不染色標(biāo)本。熒光顯微鏡也是在普通光學(xué)顯微鏡的基礎(chǔ)上，采用縈外光或藍(lán)紫光為光源，配合熒光抗體染色，用于細(xì)菌自體熒光觀察和熒光蔭球的觀察。

    2.電子偏光顯微鏡

    電子偏光顯微鏡(electron microscope, EM)是利用電子流代替可見光波，電磁圈代替放大透鏡而組成的偏光顯微鏡。電子波長極短，約為。.005二。EM放大倍數(shù)可高達(dá)數(shù)十萬倍，能分辨，run的徽拉。不僅能看清徽生物的外形.內(nèi)部超徽結(jié)構(gòu)也可一覽無遺。電子偏光顯微鏡顯示的圖像，可投射到熒光屏上，也可拍成照片。

    當(dāng)前使用的電子偏光顯微鏡有兩類，即透射電子偏光顯微鏡(transmission electron microscope. TEM)和掃描電子偏光顯微鏡(scanning electron microscope, SEM), SEM的分辨率一般較TEM低，但可消楚地顯示物體的三維立體圖像。配合電子偏光顯微鏡觀察使用的標(biāo)本制備方法有磷鎢酸或相酸筱負(fù)染色、投影法(shadowing，即以金屬噴涂投影，增強(qiáng)對(duì)比度，使圖像具有立體感)、超薄切片(ultrathin section)及冷凍蝕刻法(freeze etching)等。冷凍蝕刻法可更演晰地顯示微生物內(nèi)部的結(jié)構(gòu)。電子偏光顯微鏡標(biāo)本必須要放在真空干操的狀態(tài)下檢查，是不能應(yīng)用于觀察活的微生物。